基因組DNA的分離純化提取方法講解

[2019/7/31]

基因組DNA的分離純化提取方法講解

DNA的提取是分子生物學研究的基礎技術,提取的DNA的純度及結構完整性是進行基因工程各項研究所必需的條件。歸納基因組DNA提取的各個環(huán)節(jié)．

同時對DNA提取過程中的常見問題、原因及應對策略作簡要的分析綜述。

實驗的一般步驟為

1．破碎細胞.

2．DNA的提取

3．DNA的純化

第一步中破碎細胞常用有三種方法

①機械法：主要通過機械切力的作用使組織細胞破碎的方法。

本實驗常用的器械有玻璃勻漿器。將剪碎的組織置于管中，再

套入研桿來回研磨，上下移動，即可將細胞研碎。勻漿器的研

缽磨球和玻璃管內壁之間間隙保持在十分之幾毫米距離。此法

細胞破碎程度較高，適用于量少和動物臟器組織。②化學法：有些化學藥品可以改變細胞膜的通透性從而使內合物

有選擇地滲透出來。例如某些有機溶劑（如苯、甲苯）、抗生

素、表面活性劑、金屬螯合劑、變性劑等。

實驗中常用GA緩沖液，GA緩沖液中含有表面活性劑可以打開

細胞的磷脂雙分子層，增加通透性。且GA緩沖液是低滲溶液，細

胞易吸水漲破，達到更好打開細胞的效果。

特點：作用比較溫和

存在的問題：作用時間長，效率低；化學試劑毒性較強，同

時對產物也有毒害作用，進一步分離時需要用透析等方法除去這

些試劑。

③酶解法：利用各種水解酶，破碎細胞將細胞內含物釋放出來。

常用蛋白酶K和十二烷基硫酸鈉(SDS)消化破碎細胞。

此種方法的特點是：適用范圍廣；作用條件溫和；內含物成分不

易受到破壞。但其成本高，限制了大規(guī)模的利用且耗時較長。

以上三種破碎細胞的方法可結合使用，使細胞破碎完全，利于接

下來的步驟。

第二步中DNA的提取有兩種方法：

①沉淀法

實驗常采用異丙醇或無水乙醇快速提取DNA

一般經典酒精標本DNA提取方法都會加入蛋白酶K，且在56℃條件下消化3h以上，以達到組織中蛋白質的完全消化。

得到的提取液經RNA酶處理，酚、氯仿和異戊醇反復抽提，即可得較純的DNA產物。

好了，以上就是小編為大家分享的有關“基因組DNA的分離純化提取方法”的一些信息，希望對各位科研人員有所幫助。

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