根據(jù)試劑所采用的技術(shù)原理，主要可分為三大類：生化診斷試劑;免疫診斷試劑;分子診斷試劑。

　　按照診斷試劑功用來分，診斷試劑可以分為心血管類檢測試劑盒、性病檢測試劑，肝炎系列產(chǎn)品、腫瘤標志物檢測試劑、優(yōu)生優(yōu)育檢測試劑等大類。

　　二 臨床診斷試劑技術(shù)進展

　　臨床診斷試劑分為生化診斷試劑、免疫診斷試劑和分子診斷試劑及其它。其中以生化診斷試劑所占份額最大，臨床應(yīng)用接近34%。其次為免疫試劑，占29%。分子診斷試劑的份額較小，不到10%，但近年發(fā)展速度最快。

　　1. 生化診斷試劑

　　1985年第一批國產(chǎn)酶法診斷試劑問世以來，目前國內(nèi)生化診斷試劑企業(yè)所生產(chǎn)的試劑品種主要集中在臨床普遍開展的大約40個生化檢驗項目上，已步入技術(shù)成熟階段(表1)。

　　2. 免疫診斷試劑

　　a. ELISA/EIA試劑

　　酶聯(lián)免疫/酶免診斷(ELISA/EIA)試劑是臨床檢驗常規(guī)的檢測技術(shù)。目前，酶免試劑是傳染病血清學(xué)標志物(如肝炎、艾滋、致畸病原Torch)、腫瘤標志物及內(nèi)分泌等各種臨床免疫指標檢測的主導(dǎo)試劑(表2)。

　　b. 膠體金試劑

　　膠體金試劑具方便快捷、特異敏感、穩(wěn)定性強、不需要特殊設(shè)備和試劑、結(jié)果判斷直觀等優(yōu)點。膠體金診斷技術(shù)發(fā)展趨勢在于：

　　(1)提高膠體金質(zhì)量：改善制膠體工藝，選用適當?shù)脑噭┻M行穩(wěn)定金標記物，正確地干燥金標以提高檢測準確性、減少假陽性(假陰性)。

　　(2)實現(xiàn)多項聯(lián)檢：現(xiàn)在技術(shù)可達到用一膜包被多元抗體帶的方法研制出可同時檢測7種藥物的免疫層析試紙條，能對乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、艾滋病病毒抗體和抗原(抗HIV/HIV-1/2P)，及丙型肝炎抗體(抗HCV)等進行同時檢測，對篩選獻血者提供了很大便利。

　　(3)提高檢測靈敏度，拓寬檢測范圍：結(jié)合電化學(xué)設(shè)備等手段來拓寬其檢測范圍。

　　(4)定量測定：監(jiān)控臨床指標或確定特定分析物的相對或絕對濃度都需要定量檢測。

　　(5)在生物傳感器中應(yīng)用：通過在生物分子上連接的酶，在一定條件下催化某一反應(yīng)底物，產(chǎn)生一種非導(dǎo)電性物質(zhì)，沉積于電極表面，使電極表面的阻抗增加，達到放大信號的目的。還可在膠體金標記A蛋白的基礎(chǔ)上，制作電化學(xué)免疫傳感器，檢測血清中的森林腦炎病毒抗體及其濃度(表3)。

　　c. 化學(xué)發(fā)光試劑

　　化學(xué)發(fā)光免疫分析是將發(fā)光物質(zhì)或酶標記在抗原或抗體上，免疫反應(yīng)結(jié)束后，加入氧化劑或酶底物而發(fā)光，通過測量發(fā)光強度，根據(jù)標準曲線測定待測物的濃度�；瘜W(xué)發(fā)光免疫試劑分為三種類型：

　　(1)化學(xué)發(fā)光免疫分析試劑：魯米諾類和吖啶酯類化學(xué)發(fā)光試劑是最常用的標記發(fā)光試劑，在免疫及分子診斷領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。

　　(2)化學(xué)發(fā)光酶免疫分析試劑(CLEIA)：CLEIA應(yīng)屬酶免疫分析，只是酶反應(yīng)的底物是發(fā)光劑，操作步驟與酶免疫分析完全相同。目前，常用的酶標記物有辣根過氧化物酶(HRP)和堿性磷酸酶(ALP)。

　　(3)電化學(xué)發(fā)光(ECL)免疫分析試劑：是化學(xué)發(fā)光和免疫測定的結(jié)合，其標記物穩(wěn)定，靈敏度高，可實現(xiàn)多元檢測，可實現(xiàn)均相免疫分析，可實現(xiàn)全自動化。目前已廣泛應(yīng)用于抗原、半抗原及抗體的免疫檢測(表4)。

　　d. 單克隆抗體

　　作為醫(yī)學(xué)診斷試劑，單克隆抗體的均一性和生物活性單一性使抗原抗體反應(yīng)結(jié)果便于質(zhì)量控制，利于標準化和規(guī)范化。目前單抗在診斷試劑盒的主要用途如下：

　　(1)診斷各類病原體：應(yīng)用最廣，如用于診斷乙肝病毒、皰疹病毒、巨細胞病毒、EB病毒和各種微生物感染的試劑等。尤其是在鑒別菌種亞型、病毒的變異株以及寄生蟲不同生活周期的抗原性等方面具有獨特優(yōu)勢。

　　(2)腫瘤特異性抗原和腫瘤相關(guān)抗原的檢測：用于腫瘤的診斷，分型和定位。腫瘤相關(guān)抗原(如甲胎蛋白和癌胚抗原)的單抗已用于臨床診斷。也有人利用單抗進行腫瘤分型，對制定治療方案和判斷預(yù)后也有幫助。用抗腫瘤單抗檢查病理標本，可協(xié)助確定轉(zhuǎn)移腫瘤的原發(fā)部位。以放射性核素標記單抗主要用于體內(nèi)診斷，結(jié)合X射線斷層掃描技術(shù)，可對腫瘤的大小及其轉(zhuǎn)移灶做出定位判斷。

　　(3)檢測淋巴細胞的表面標志;用于區(qū)分細胞亞群和細胞分化階段。例如檢測CD系列標志，有助于了解細胞的分化和T細胞亞群的數(shù)量和質(zhì)量變化，對多種疾病診斷具有參考意思儀。對細胞表面抗原的檢查在白血病患者的疾病分期、治療效果、預(yù)后判斷等方面也有指導(dǎo)作用。組織相容性抗原是移植免疫學(xué)的重要內(nèi)容，而應(yīng)用單抗對HLA進行位點檢查與配型，可得到更可信的結(jié)果。

　　(4)機體微量成分的測定： 應(yīng)用單抗和免疫學(xué)技術(shù)，可對機體的多種微量成分進行測定，如諸多酶類、激素、維生素等，對受檢者健康狀態(tài)判斷、疾病檢出、指導(dǎo)診斷和治療均有實際意義。

　　3. 分子診斷試劑

　　分子診斷是采用DNA，RNA或蛋白標記(分析子)來識別疾病，判定其階段和反應(yīng)以輔助治療，或預(yù)測個體對某疾病的易感程度。目前國內(nèi)分子診斷試劑正在迅速崛起。

　　目前的分子診斷產(chǎn)品主要是由單一疾病的分子標記設(shè)計的檢測。

　　分子診斷的主要應(yīng)用范圍為：傳染性疾病分子診斷、遺傳性疾病分子診斷、腫瘤分子診斷。

　　分子診斷試劑以其準確，靈敏度高而有著不可替代的優(yōu)勢，但現(xiàn)有分子診斷對操作人員和設(shè)備、使用環(huán)境要求相對較高。簡單、快速便于普及的快速診斷正隨著農(nóng)村合作醫(yī)療的深入開展，成為分子診斷試劑的新發(fā)展趨勢，目前產(chǎn)品種類尚少。

　　分子診斷試劑的另一個發(fā)展趨勢是采用多通道平臺，如DNA和蛋白微陣列來執(zhí)行平行標記分析，包括同時測定幾類生物標記(如DNA和蛋白質(zhì))，并將朝自動化和小型化發(fā)展，結(jié)合新技術(shù)，進行超靈敏的定量檢測，在多項診斷應(yīng)用中增加靈敏度并降低成本，使免疫測定和核酸檢測可以在同一臺儀器完成。理論上，使用者可以不必知道化驗對象需要采用何種診斷方式。

　　三 臨床診斷試劑應(yīng)用進展

　　1. 心血管診斷試劑

　　a. 反映心肌損傷標志物

　　對于急診胸部不適疑為心肌梗死的患者，目前臨床多根據(jù)癥狀、心電圖結(jié)合血液心肌損傷標志物如肌酸激酶(CK)、肌酸激酶MB同工酶(CK-MB)、肌紅蛋白(Mb/Myo)及心肌肌鈣蛋白(cardiacTrop onin，cTn)I或T等進行診斷與鑒別診斷。這些標志物在正常情況下存在于心肌細胞中，心肌梗死發(fā)作后釋放入血，若在血中發(fā)現(xiàn)這些物質(zhì)水平升高則表明有心肌損傷存在。

　　b. 了解心臟功能的標志物

　　鈉尿肽又稱腦鈉肽(BNP)是調(diào)節(jié)體液、體內(nèi)鈉平衡、血壓的重要激素，當心血容積增加和左室壓力超負荷時即可大量分泌，檢測BNP或NT-proBNP有助于確立心力衰竭的診斷。

　　c. 預(yù)測心臟危險事件的標志物

　　臨床測定血清總膽固醇(TC)以及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C，也稱“壞膽固醇”)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C，也稱“好膽固醇”)和甘油三酯(TG)，甚至血清載脂蛋白AI、B及脂蛋白(a)等項目水平對心臟事件的危險評估都是非常重要的。

　　C反應(yīng)蛋白(CRP)是一種炎性標志物，CRP升高的病人，其心臟病發(fā)作、猝死及血管疾病的危險性增加。

　　此外測定脂蛋白磷脂酶A2(LP-PLA2)水平是否升高，可預(yù)示動脈是否有斑塊形成和有否破裂危險性。

　　2. 性病系列診斷試劑

　　目前，我國企業(yè)自主研制且獲得生產(chǎn)批準的HIV診斷試劑種類包括：HIV 抗體酶聯(lián)免疫檢測試劑、HIV抗體快速檢測試劑、HIVp24抗原檢測試劑、HIV病毒載量檢測試劑(熒光法)以及HIV抗體確認試劑等，相應(yīng)產(chǎn)品的研制正在進入第四代。

　　第一代HIV抗體診斷試劑主要是用天然HIV抗原包被在微孔板或載玻片上，與檢測樣品中的特異抗體結(jié)合，用酶或熒光標記抗人IgG 抗體作為標記的第二抗體，檢測HIVIgG抗體。

　　由于抗原通常會含有宿主細胞的成分，從而造成假陽性。由于雜蛋白的存在會與抗原競爭包被位點，因此，第一代試劑的靈敏度受到了一定的限制。

　　第二代HIV診斷試劑主要使用基因工程重組和/或人工合成多肽作為包被抗原，基因工程抗原主要是采用大腸桿菌等系統(tǒng)表達的HIV-1型抗原，多肽合成抗原主要包括合成的HIV-1型抗原片段和HIV-2型的gp36多肽。與第一代試劑相比，第二代HIV診斷試劑的靈敏度明顯提高，但由于采用間接法，其靈敏度仍存在局限性，也有一定的假陽性。

　　第三代HIV診斷試劑主要使用基因工程重組抗原并采用雙抗原夾心法的原理檢測抗HIV 的總抗體。第三代試劑可同時檢測抗-HIV 所有類型抗體可以起到縮短窗口期的作用，提高了試劑的敏感性，同時特異性也得到了提高。

　　第四代HIV診斷試劑是在第三代試劑的基礎(chǔ)上，加入HIV-1p24抗原檢測系統(tǒng)，可同時檢測血清/血漿中HIV抗體和p24抗原，進一步縮短了檢測的窗口期。

　　除HIV診斷試劑外，目前針對梅毒的診斷試劑以TPHA試劑為代表，其原理是針對梅毒螺旋體特異性抗體的血球凝集試驗，血球表面包被有梅毒螺旋體天然抗原，直接檢測患者血液中特異性抗體。

　　3. 肝炎系列診斷試劑

　　a. 乙型肝炎診斷進展

　　乙型肝炎血清學(xué)標志檢測是診斷乙型肝炎的主要方法。一般檢測血清中乙型肝炎病毒的蛋白質(zhì)，也就是乙型肝炎病毒的抗原或抗體。

　　以往檢測的方法主要有瓊脂免疫擴散，對流免疫電泳、補體結(jié)合實驗、反向間接血凝、免疫粘附血凝、免疫電鏡、放射免疫自顯影、免疫酶法，其中免疫酶法敏感性高。以上檢測技術(shù)現(xiàn)在大多已淘汰。目前應(yīng)用的主要檢測技術(shù)是酶聯(lián)免疫吸附實驗，免疫膠體金法等。

　　近年來發(fā)展建立了多種敏感準確地定量檢測乙型肝炎病毒脫氧糖核酸(HBV-DNA)的方法，根據(jù)其原理主要分為熒光標記PCR技術(shù)和酶標記探針定量 PCR技術(shù)。前者自動化程度高、省時、可免除PCR 的后處理、減少PCR產(chǎn)物的污染，已成為定量檢測乙型肝炎病毒脫氧核糖核酸的主要方法。但目前還不能用HBV-DNA 定量檢測完全取代乙型肝炎e 抗原檢測系統(tǒng)。

　　乙型肝炎病毒前S1 抗原(PreS1)是近幾年來發(fā)現(xiàn)的乙型肝炎病毒早期診斷的標志物。乙型肝炎病毒前S1抗原是HBV-DNA 的S區(qū)的前S1基因編碼產(chǎn)物，前S1抗原僅存在于具傳染性的完整的乙型肝炎病毒顆粒上，由于PreS1只存在于丹氏顆粒，故有很高的特異性。用微粒子酶聯(lián)免疫分析技術(shù)法檢測乙肝二對半和用酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測乙型肝炎前S1抗原的指標將互為補充。

　　b. 丙型肝炎國產(chǎn)診斷試劑進展

　　目前防止丙肝傳播的唯一有效手段是利用高質(zhì)量的丙肝診斷試劑(抗HCV EIA試劑)阻斷帶毒血液進入人體或被用于生產(chǎn)血液制品。

　　4. 腫瘤標志物檢測試劑

　　a. 常用腫瘤標志物及進展

　　近年來，腫瘤標志物〔癌基因、抑癌基因和腫瘤相關(guān)基因及其產(chǎn)物，循環(huán)核酸(DNA和mRNA)標志物〕檢測及應(yīng)用已進人分子和基因水平階段。蛋白質(zhì)組學(xué)成為腫瘤標志物研究的熱點。血清腫瘤標志物已成為腫瘤患者實驗室檢查的重要指標(表5)。

　　b. 腫瘤標志物的聯(lián)合檢查

　　由于腫瘤標志物缺乏組織特異性，同一腫瘤可出現(xiàn)幾種標志物，而不同腫瘤又可出現(xiàn)同一種標志物。為提高腫瘤標志物的臨床應(yīng)用價值，根據(jù)不同腫瘤和不同標志物的特性，合理選擇多種標志物聯(lián)合檢測非常重要。需注意的是，聯(lián)合檢測提高了敏感性，但特異性有所降低，因此應(yīng)選擇特異性強的標志物進行組合。目前不少腫瘤標志物的臨床價值尚不明確，并缺乏標準化的試劑、質(zhì)控標準和測定方法，不加選擇地進行多種標志物聯(lián)合檢查，不僅達不到提高檢測效率，還會增加檢測成本。應(yīng)選擇常見腫瘤的最佳標志物組合應(yīng)用于臨床診斷(表6)。

　　c. 惡性腫瘤的循環(huán)核酸基因標志物

　　循環(huán)核酸是指存在于外周血循環(huán)中的游離DNA和mRNA。近年研究證實，腫瘤患者循環(huán)DNA和mRNA具有腫瘤特征，應(yīng)用PCR或 RT-PCR檢測腫瘤循環(huán)核酸，對腫瘤的早期診斷、微轉(zhuǎn)移監(jiān)測具有重要價值。與傳統(tǒng)的腫瘤相關(guān)抗原檢測相比，循環(huán)核酸檢測敏感性高、特異性強。

　　d. 蛋白質(zhì)組技術(shù)檢測分析腫瘤標志物

　　蛋白質(zhì)組技術(shù)能高通量、自動化地對腫瘤蛋白質(zhì)表達譜進行全面分析，有助于發(fā)現(xiàn)腫瘤早期診斷的特異性分子標志。目前蛋白質(zhì)組技術(shù)主要有雙向凝電泳、基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜和表面增強激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(SELDI-TOF-MS)，能快速、靈敏、高通量、自動化分析血清中蛋白質(zhì)譜型的變化，已應(yīng)用于檢測前列腺癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、直腸癌等。

　　我國已研制出多腫瘤標志物蛋白芯片，應(yīng)用微陣列原理，采用化學(xué)發(fā)光免疫膜技術(shù)和計算機圖像分析，實現(xiàn)多腫瘤標志物的高通量、并行性聯(lián)合檢測和綜合分析，可快速、同時檢測多種腫瘤標志物，顯著提高了腫瘤診斷的敏感性和特異性。臨床應(yīng)用多腫瘤標志物蛋白芯片檢測卵巢癌、大腸癌、肺癌的診斷陽性率分別達 90%，85%和80%。對腫瘤患者的療效觀察、轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)監(jiān)測也具有很高的應(yīng)用價值。

　　5. 優(yōu)生優(yōu)育類診斷試劑

　　a. 在妊娠早期篩查唐氏綜合征胎兒的新方法

　　新方法可以發(fā)現(xiàn)胎齡只有3個月的患兒，包括檢測母體的妊娠相關(guān)血漿蛋白A(PAPP-A)、人絨毛膜促性腺素(HCG)水平和用超聲的方法測量胎兒頸后皮膚(頸透明帶)。美國國立衛(wèi)生研究院(NIH)評估認為，這種方法在妊娠前3個月的檢出率可達85%，而目前常規(guī)用于篩查唐氏綜合征的方法在妊娠4~6 個月期間的檢出率為65%。目前常規(guī)篩查方法的假陽性率約為5%，這對那些得到假陽性診斷的妊娠婦女及其家庭無疑是一個打擊。

　　b. 斑點金免疫滲濾法檢測血清抗精子抗體

　　采用經(jīng)SephadexG-75-抗人全血清柱親和層析純化的人精子抗原和膠體金標記的SPA，根據(jù)免疫滲濾原理，建立抗精子抗體 (ASAb)的斑點金免疫滲濾法檢測法。結(jié)果證明純化的人精子抗原具有較好的特異性;斑點金免疫滲濾法與ELISA法比較，符合率為97.7%。特異性為 96.2%，敏感性為88.9%，陽性預(yù)測值84.2%，陰性預(yù)測值97.2%。斑點金免疫滲濾法方法檢測血清抗精子抗體有較好的特異性和敏感性，重復(fù)性好，試劑穩(wěn)定，操作簡便快速，具有臨床應(yīng)用價值。

　　6. SARS診斷試劑

　　a. PCR試劑盒

　　(1)反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)試劑盒：采取患者的鼻咽部洗液，肺泡灌洗液，肺穿刺液，咽部拭子痰、血、尿、便等進行基因擴增。美國大規(guī)模啟用的非典病毒快速檢測試劑也是采用了RT-PCR技術(shù)。RT-PCR 可作為早期檢測法，特別對于如SARS這樣的呼吸道傳播的病毒性傳染病能作到早診斷、早隔離，控制傳染源的目的。但該法存在假陰性、假陽性的問題。

　　(2)熒光定量PCR試劑盒：其基本原理與普通PCR相同，只是定量體系不同。該技術(shù)借用熒光信號來檢測PCR產(chǎn)物。一方面提高了靈敏度，另一方面還可做到PCR每循環(huán)一次就收集一個數(shù)據(jù)，建立擴增曲線，準確確定CT值，從而根據(jù)CT值確定起始DNA拷貝數(shù)。該試劑盒除了用于非典流行病源的篩查，環(huán)境污染的檢測和臨床應(yīng)用外，還用于海岸檢驗檢疫，如動植物、食品、血液制品的非典病毒的核酸檢測。

　　(3)其它PCR試劑盒：如熒光聚合酶鏈反應(yīng)(F-PCR)來檢測SARS病毒的方法，該試劑盒可檢測出SARS-COV核酸且有較高的靈敏度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和特異性。

　　與免疫學(xué)檢測相比，PCR試劑盒檢測可不受病人體內(nèi)有無抗體，抗體多少的限制。只要病人被感染，其血液、唾液等標本中就含有病毒，即使還在潛伏期也可通過PCR檢測出來。但是定量PCR價格高，不利于大面積早期篩查，檢測、診斷。

　　b. 抗體試劑盒

　　(1)酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試劑盒：檢測SARS病人血清中IgM、IgG。在感染早期檢測不到抗體，最早IgM檢測要在7 d左右，IgG要在10 d后。發(fā)病后21 d后可獲得陽性結(jié)果。

　　(2)免疫熒光檢測(IFA)試劑盒：以生長在細胞內(nèi)已滅活的病毒為抗原，將SARS感染細胞固定體患者抗體與抗原結(jié)合后用免疫熒光標記的二抗來檢測。用免疫熒光顯微鏡觀察。發(fā)病10 d后，就能進行檢測，主要適用于冠狀病毒感染的輔助診斷。

　　(3)其它抗體檢測試劑盒：抗體金診斷試劑盒、基于單克隆抗體試劑盒——“人T淋巴細胞亞群雙色熒光標記單抗分型試劑盒”可在1 h內(nèi)檢測出非典病人血液中CD4降低和CD4/CD8比值。不僅為確診提供臨床依據(jù)，且對后續(xù)搶救、治療、檢測治療效果和病程有指導(dǎo)意義。

　　7. HTLV診斷試劑

　　人類T淋巴細胞白血病病毒 (HTLV)已被證實與成人T淋巴細胞白血病和多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān)。試劑盒對現(xiàn)有能獲得的全部HTLV血清的靈敏度達100%，其特異度達 99.94%。

　　四 中國診斷試劑的產(chǎn)業(yè)發(fā)展

　　全球體外診斷試劑2005年的市場達到73億美元，且仍在以并以16.6%的速度增長，而我國臨床診斷市場的年增長率高達15%~20%。

　　中國的醫(yī)用診斷試劑市場上，據(jù)不完全統(tǒng)計，至2005年5月，中國批準上市的(包括國產(chǎn)和進口)主要醫(yī)用診斷試劑產(chǎn)品共有490種，其中，醫(yī)用酶免試劑產(chǎn)品213種、快速診斷及PCR試劑品種95種、常用化學(xué)發(fā)光試劑64種、放免試劑品種118種。

　　我國診斷試劑產(chǎn)業(yè)的發(fā)展近期目標，最重要的就是要建立診斷領(lǐng)域一系列高水平科技平臺，包括：診斷用基礎(chǔ)材料，如工具酶、抗原、抗體和高分子材料等;診斷用基礎(chǔ)材料與其它材料或技術(shù)相結(jié)合所建立的診斷用方法(如臨床生化、免疫化學(xué)等);診斷用全自動或者半自動的儀器及配套試劑;評價、驗證或監(jiān)督臨床檢驗醫(yī)學(xué)診斷試劑、儀器等的實驗室網(wǎng)絡(luò)或參考體系等。而診斷試劑產(chǎn)業(yè)發(fā)展的遠期目標，則是在高水平的診斷技術(shù)平臺基礎(chǔ)上，研制開發(fā)更多具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的高水平診斷試劑。