比色法

　　1.原理

　　食物中的膽堿經(jīng)過(guò)堿處理提取后，通過(guò)Florisil柱色譜純化，然后用雷納克鹽(reineckate)與膽堿反應(yīng)形成粉紅色的膽堿-雷納克鹽復(fù)合物，這種復(fù)合物被丙酮洗脫后，在526nm有最大吸收，其吸收值與膽堿濃度成正比。

　　2.適用范圍

　　參照《Methods of Vitamin Assay》。使用于各類(lèi)食物中膽堿的測(cè)定。最小檢出限為0.15mg。

　　3. 儀器與設(shè)備

　　(1) 實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。

　　(2) 回流提取裝置。

　　(3) 色譜柱：為0.8cm(內(nèi)徑)×30cm的玻璃柱，柱上端為容積30～50ml的儲(chǔ)液池，底端收縮變細(xì)，并裝有活塞。活塞上約1 cm處有一玻璃篩板，篩板孔徑為16～30μm。

　　(4) 分光光度計(jì)。

　　4. 試劑

　　除特殊說(shuō)明外，所有試劑均為分析級(jí)，實(shí)驗(yàn)用水為蒸餾水。

　　(1) 甲醇。

　　(2) 氯仿。

　　(3) 乙酸甲酯。

　　(4) 丙酮：用前重蒸餾。

　　(5) 10% 丙酮： 取50ml丙酮溶解于450ml水中。

　　(6) 冰乙酸。

　　(7) 冰乙酸-甲醇溶液：取50ml冰乙酸和400ml甲醇混合。

　　(8) 飽和氫氧化鋇提取液：于1000ml甲醇中加入40g無(wú)水Ba(OH)2，攪拌10min,再加入100ml氯仿，混合，使Ba(OH)2飽和，過(guò)濾去除多余的Ba(OH)2。

　　(9) 硅鎂吸附劑(Florisil)：Sigma 公司，60～100目。

　　(10) 雷納克銨(Ammonium Reineckate)飽和溶液：稱(chēng)取2～3g雷納克銨，加入100ml水中，攪拌10min ,過(guò)濾去除多余的雷納克銨。實(shí)驗(yàn)當(dāng)日配制。

　　(11) 膽堿標(biāo)準(zhǔn)貯備液(5g/L)：準(zhǔn)確稱(chēng)取無(wú)水氯化膽堿0.57613g，溶解于水中，并定容至100mL。冰箱保存。

　　(12) 膽堿標(biāo)準(zhǔn)工作液(1g/L)：準(zhǔn)確吸取2.0ml標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用水稀釋定容至100ml。