一、血清

　　細(xì)胞在單純的基礎(chǔ)培養(yǎng)基中不能存活，在特殊類型的細(xì)胞培養(yǎng)中必須提供某些痕量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及生長(zhǎng)因子才能使細(xì)胞得以生長(zhǎng)并維持生長(zhǎng)狀態(tài)。基礎(chǔ)培養(yǎng)基常常要添加血清，血清終濃度多為5~20%。特殊用途的血清來源須用經(jīng)驗(yàn)確定，廣泛應(yīng)用的血清種類有馬血清與胎牛血清。胎牛血清中富含有絲分裂因子，常選其作增殖細(xì)胞用的血清，也用于細(xì)胞系和原代培養(yǎng)。而馬血清常常用來作有絲分裂后的神經(jīng)元培養(yǎng)。然而，很多人也將胎牛血清用于神經(jīng)元培養(yǎng)，也有人用馬血清來培養(yǎng)膠質(zhì)細(xì)胞。用大鼠進(jìn)行神經(jīng)元培養(yǎng)的某些研究者喜歡使用同型血清;人類的胎盤血清，亦曾用于神經(jīng)組織的器官類型的培養(yǎng)，也用在一些特殊培養(yǎng)種類中。

　　血清的不同批號(hào)含有不同的成分，所以許多人發(fā)現(xiàn)，應(yīng)該在使用前對(duì)血清進(jìn)行測(cè)試。大多數(shù)試劑商提供樣品，所滿意的批號(hào)即可選用，這樣可以一次得到足夠一年用量的血清，血清在使用前通常在56℃加熱30分鐘，這一過程稱為滅活。

　　二、抗生素

　　在細(xì)胞培養(yǎng)中最常用的抗生素是青霉素(常用濃度是25~100ui/ml)與鏈霉素(25~100μg/ml)。這兩種抗生素常混合使用。在一些實(shí)驗(yàn)室里，它們常規(guī)加入所有的培養(yǎng)基中。慶大霉素(10~100μg/ml)通常有廣譜抗菌效應(yīng)，并具有溶液穩(wěn)定性，故也被一些實(shí)驗(yàn)室使用，特別是當(dāng)有低水平的污染存在時(shí)更是這樣。以上這些試劑對(duì)霉菌與酵母菌的污染均無效。

　　盡管很多實(shí)驗(yàn)室在細(xì)胞系的培養(yǎng)基中常規(guī)加入抗生素作繼代培養(yǎng)，但仍建議不要在原代培養(yǎng)中加入抗生素，其理由之一是獲得的細(xì)胞是無菌的，原代培養(yǎng)時(shí)的細(xì)菌污染很少發(fā)生。其次，盡管認(rèn)為抗生素對(duì)細(xì)胞代謝的影響可忽略，但最好避免使用它們，以免細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境的不穩(wěn)定。最重要的是要意識(shí)到培養(yǎng)中主要污染物的類型，它們通常暗示了問題的來源。

　　三、抗有絲分裂劑

　　某些DNA合成抑制劑對(duì)分裂細(xì)胞有毒，但對(duì)沒有DNA合成的細(xì)胞僅有輕微影響。由于神經(jīng)元通常缺乏DNA合成能力，因此對(duì)抗有絲分裂劑沒有多大反應(yīng)。這樣的試劑常常用于神經(jīng)元的培養(yǎng)，以消除或減少非神經(jīng)元群體。若要?dú)⑺浪�有的非神�?jīng)元細(xì)胞，可以先加入血清或生長(zhǎng)因子來保證有高比例的非神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行DNA合成，此時(shí)再加入抗有絲分裂劑。但是，某些細(xì)胞在它的細(xì)胞周期的某些時(shí)相時(shí)對(duì)抗有絲分裂劑是不敏感的。不過，可以重復(fù)的將抗有絲分裂劑使用于增殖的細(xì)胞群體。在CNS神經(jīng)元的培養(yǎng)中抗有絲分裂劑常常在星形細(xì)胞形成單層后加入，此時(shí)，星形細(xì)胞由于接觸抑制而終止了DNA的合成(即細(xì)胞停止增殖)，它們不會(huì)因抗有絲分裂劑的加入而死亡。原代培養(yǎng)中用這種方法阻止成纖維細(xì)胞的過度增殖是十分必要的。有兩種抗有絲分裂劑常用于神經(jīng)元的培養(yǎng)：Fluorodexyuridine，是胸苷合成酶抑制劑，一般使用濃度為～10μM。尿苷(10μM)也常使用，可阻止不分裂細(xì)胞的RNA合成。另外，阿糖胞苷也常被使用，其使用濃度為5～50μM。使用任何一種抗有絲分裂劑，都必須考慮它的神經(jīng)原毒性，應(yīng)該確定最低效應(yīng)的使用濃度。阿糖胞苷在很低的濃度下，也會(huì)對(duì)某些種類的神經(jīng)元有毒性，可以造成特定神經(jīng)原的死亡。其他的抗有絲分裂劑尚未表現(xiàn)出這種毒性。

　　四、培養(yǎng)的保持

　　培養(yǎng)物是應(yīng)該保持在孵箱中的。孵箱可以自動(dòng)將O2與CO2混合很快達(dá)到培養(yǎng)基的設(shè)計(jì)要求，空氣中的氧濃度比血液和腦脊液中要高得多。對(duì)于某些細(xì)胞的生長(zhǎng)，包括神經(jīng)原，應(yīng)使氧含量處在一個(gè)較低的水平�？梢杂梅跸溥_(dá)到這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，但這樣的孵箱并未廣泛使用。

　　高濕度可避免培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的蒸發(fā)，保持孵箱中的濕度通常是在箱底部放上一大盆水，這水應(yīng)該經(jīng)常換，乘水容器應(yīng)經(jīng)常消毒以防霉菌生長(zhǎng)。若孵箱曾被霉菌孢子嚴(yán)重污染過，那么要想完全去除污染則會(huì)非常困難。當(dāng)培養(yǎng)物必須要長(zhǎng)期保持在孵箱中時(shí)，應(yīng)采用較少培養(yǎng)基的瓶、皿，且將蓋子蓋緊以避免蒸發(fā)，或采用相應(yīng)的按比例供空氣的孵箱。

　　溫度的精確調(diào)節(jié)應(yīng)定期檢查，孵箱溫度常設(shè)置為37℃或較低溫度。細(xì)胞在低溫時(shí)可有較長(zhǎng)時(shí)間的忍耐限度，但當(dāng)溫度升至39℃時(shí)，幾小時(shí)內(nèi)即死亡。

　　維持培養(yǎng)物的最佳方案常常改變。例如培養(yǎng)膠質(zhì)細(xì)胞時(shí)，要經(jīng)常換液以使其增殖達(dá)到最大。而在培養(yǎng)某些神經(jīng)原時(shí)，則要求盡可能少的換液，神經(jīng)原在兩次換液之間的條件下長(zhǎng)的最好。大腦皮質(zhì)的培養(yǎng)要求在不換液的情形下維持一個(gè)月以上。另一方面，象海馬神經(jīng)原那樣的細(xì)胞，倚賴于條件培養(yǎng)基，若換液太頻繁細(xì)胞就會(huì)衰退，此時(shí)，可采用1/3或1/2換液的方式。