高效液相色譜是目前應(yīng)用最多的色譜分析方法，高效液相色譜系統(tǒng)由流動相儲液體瓶、輸液泵、進樣器、色譜柱、檢測器和記錄器組成，其整體組成類似于氣相色譜，但是針對其流動相為液體的特點作出很多調(diào)整。

　　1).過濾流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜。

　　2).對抽濾后的流動相進行超聲脫氣10-20分鐘。

　　3).打開HPLC工作站(包括計算機軟件和色譜儀)，連接好流動相管道，連接檢測系統(tǒng)。

　　4).進入HPLC控制界面主菜單，點擊manual，進入手動菜單。

　　5).有一段時間沒用，或者換了新的流動相，需要先沖洗泵和進樣閥。沖洗泵，直接在泵的出水口，用針頭抽取。沖洗進樣閥，需要在manual菜單下，先點擊purge，再點擊start，沖洗時速度不要超過10ml/min。

　　6).調(diào)節(jié)流量，初次使用新的流動相，可以先試一下壓力，流速越大，壓力越大，一般不要超過2000。點擊injure，選用合適的流速，點擊on，走基線，觀察基線的情況。

　　7).設(shè)計走樣方法。點擊file，選取se-lectusersandmethods，可以選取現(xiàn)有的各種走樣方法。若需建立一個新的方法，點擊newmethod。選取需要的配件，包括進樣閥，泵，檢測器等，根據(jù)需要而不同。選完后，點擊protocol。一個完整的走樣方法需要包括：a.進樣前的穩(wěn)流，一般2-5分鐘;b.基線歸零;c.進樣閥的loading-inject轉(zhuǎn)換;d.走樣時間，隨不同的樣品而不同。

　　8).進樣和進樣后操作。選定走樣方法，點擊start。進樣，所有的樣品均需過濾。方法走完后，點擊postrun，可記錄數(shù)據(jù)和做標(biāo)記等。全部樣品走完后，再用上面的方法走一段基線，洗掉剩余物。

　　9).關(guān)機時，先關(guān)計算機，再關(guān)液相色譜。

　　10).填寫登記本，由負(fù)責(zé)人簽字。

　　注意事項：

　　1).流動相均需色譜純度，水用20M的去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。

　　2).柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要讓液體過柱子。

　　3).所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾。

　　4).壓力不能太大，最好不要超過2000psi。