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親和色譜的載體選擇

[2012/11/5]

  用于親和色譜的理想載體應(yīng)具有下列特性:⑴不溶性:不溶于水;⑵滲透性:疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),容許大分子自由通過;⑶有一定硬度,最好為均一的珠狀;⑷具有大量可供反應(yīng)的化學(xué)基團(tuán),能與大量配基共價(jià)連接;⑸非特異性吸附能力極低;⑹能抗微生物和酶的侵蝕;⑺有較好的化學(xué)穩(wěn)定性;⑻親水性。選擇配基根據(jù)對(duì)純化大分子的特異性的全面認(rèn)識(shí)。

  選擇也的配基有兩條標(biāo)準(zhǔn):第一是蛋白質(zhì)和配基之間必須有強(qiáng)的親和力,解離常數(shù)在5mM以上不是好配基;相反親和力太高也是有害的,因?yàn)樵诮怆x蛋白質(zhì)──配基復(fù)合物時(shí)所需的條件就要強(qiáng)烈,這樣可能使蛋白質(zhì)變性。例如用抗生物素蛋白作配基純化含生物素的羧化酶時(shí),生物素──抗生物素蛋白復(fù)合物的解離常數(shù)達(dá)10-15M,解離時(shí)需要pH1.5,6M鹽酸胍,在這種條件中。羧化酶大多數(shù)已經(jīng)變性。選擇配基的第二個(gè)標(biāo)準(zhǔn)是,配基必須具有適當(dāng)?shù)幕瘜W(xué)基團(tuán),這種基團(tuán)不參與配基與蛋白質(zhì)之間特異結(jié)合,但可用于活化和載體相連接,同時(shí)又不影響配基與蛋白質(zhì)之間的親和力。

  瓊脂糖凝膠親水性強(qiáng),理化性質(zhì)穩(wěn)定(商品名:Sepharose);聚丙烯酰胺凝膠理化性質(zhì)穩(wěn)定,耐有機(jī)溶劑及去污劑,抗微生物能力強(qiáng),特別適應(yīng)用配基與提取物親和力比較弱的物質(zhì)。葡聚糖凝膠:有良好的化學(xué)及物理性質(zhì),孔經(jīng)小。纖維素非特易吸附嚴(yán)重,廉價(jià),易得。