高效液相色譜技術,HPLC是近期發(fā)展起來的一種具有高靈敏度、高選擇性的高效快速分離、分析技術.它既能用于微量組分的分析測定，又能用于大量的制備分離，靈活多樣，應用范圍已超過其它各種分離方法。如果HPLC使用人員能在分析樣品之時就熟悉常見的問題并加以解決，就能避免許多麻煩，讓您在HPLC使用過程中輕松應對。

　　1高效液相色譜儀系統

　　液相色譜儀主要由貯液瓶、泵、進樣器、柱子、柱溫箱、檢測器、數據處理系統組成(見圖1)。對于整個系統而言，柱子、泵和檢測器是核心部件，同時也是易出問題的主要部位。

　　2常見問題及解決方法

　　高效液相色譜儀作為一種高精密儀器，如果在使用過程中操作不當的話,就容易導致一些問題，其中最常見的就是柱壓問題、漂移問題、峰形異常問題。

　　2.1柱壓問題

　　柱壓問題是使用高效液相色譜過程中需要密切注意的地方，柱壓的穩(wěn)定與色譜圖峰形的好壞、柱效、分離效果及保留時間等密切相關。所謂柱壓穩(wěn)定并不是指壓力值穩(wěn)定于一個恒定值，而是指壓力波動范圍在345kPa以內(在使用梯度洗脫時，柱壓平穩(wěn)、緩慢的變化是允許的)。壓力過高、過低都屬于柱壓問題。

　　2.1.1壓力過高

　　這是高效液相色譜儀在使用中最常見的問題，指的是壓力突然升高，一般都是由于流路中有堵塞的情況。此時，我們應該分段進行檢查。

　　①首先斷開真空泵的入口處，此時PEEK管里充滿液體，使PEEK管低于溶劑瓶，看液體是否自由滴下，如果液體不滴或緩慢滴下，則是溶劑過濾頭堵塞。處理方法：用30%的硝酸浸泡0.5h，在用超純水沖洗干凈。如果液體自由滴下，溶劑過濾頭正常，再檢查。②打開Purge閥，使流動相不經過柱子，如果壓力沒有明顯下降，則是過濾頭堵塞。處理方法：將過濾頭取出，用10%的異丙醇超聲30min。如果壓力降至690kPa以下，過濾頭正常，再檢查。③把色譜柱出口端取下，如果壓力不下降，則是柱子堵塞。處理方法：如果是緩沖鹽堵塞，則用95%的水沖至壓力正常;如果是一些強保留的物質導致堵塞，則要用比現在流動相更強的流動相沖至壓力正常。假如按上面的方法長時間沖洗壓力都不下降，則可考慮將柱子的進出口反過來接在儀器上，用流動相沖洗柱子。這時，如果柱壓仍不下降，只有換柱子入口篩板，但一旦操作不慎，很容易造成柱效下降，所以盡量少用。

　　2.1.2壓力過低

　　壓力過低的現象一般是由于系統泄漏，處理方法：尋找各個接口處，特別是色譜柱兩端的接口，把泄漏的地方旋緊即可。當然還有一個原因就是泵里進了空氣，但此時表現的往往是壓力不穩(wěn)，忽高忽低，更嚴重一點會導致泵無法吸進液體。處理方法：打開Purge閥，用3~5ml/min的流速沖洗，如果不行，則要用專用針筒在排空閥處借住外力將氣泡吸出。

　　2.2漂移問題

　　主要包括基線漂移和保留時間漂移。

　　2.2.1基線漂移

　　一般說來，機器剛啟動時，基線容易漂移，大概要30min的平衡時間，如果用了緩沖溶液或緩沖鹽，還有就是在低波長下(220nm)平衡時間相對會比較長，但如果在實驗過程中發(fā)現基線漂移，則要考慮下面的原因(見表1)。

　　2.2.2保留時間漂移

　　保留時間重現是液相性能好壞的一個重要標志，同一種東西，兩次的保留時間相差不要超過15s，超過了30s可看做保留時間漂移，就無法進行定性，要考慮以下原因(見表2)。

　　2.3峰形異常問題

　　峰形問題是液相的主要問題，在做液相過程中，我們就是要變換不同的條件來改善不好的峰形，對于各種各樣的異常峰，要區(qū)別對待。